服務(wù)編碼
項目名稱
項目報價
項目周期
BT5001
細胞培養(yǎng)
2000元
1-2周
BT5002
細胞瞬時轉(zhuǎn)染
3000元
BT5003
穩(wěn)定細胞系構(gòu)建
咨詢
一、服務(wù)內(nèi)容
1、細胞轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定表達細胞株篩選
通過轉(zhuǎn)染試劑或電穿孔方式等方式，將目的基因?qū)胭N壁細胞或懸浮細胞24-48小時后，目的基因即在細胞內(nèi)表達。此時為了建立穩(wěn)定細胞系，可根據(jù)不同基因載體中所含的抗性標記，選用相應(yīng)的藥物對靶細胞進行篩選，從而得到穩(wěn)定表達外源基因的細胞克隆。觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應(yīng)會很快丟失）。
2、針對不同種類細胞使用藥物，低氧，壓力等外源因素進行刺激等處理，建立相關(guān)的細胞模型，從而進行后續(xù)的研究工作。
二、樣品要求（樣品處理及保存見附件）
1、干冰運輸：取對數(shù)生長期的細胞，消化后低速離心1000rpm，5min收集細胞，加入適量配制好的凍存液后吹打均勻。將細胞分裝入凍存管中，標明細胞的名稱、細胞代次、凍存時間及操作者；放4℃冰箱30min，-20℃30min到1h，-80℃過液，然后放入液氮罐；細胞數(shù)目不少于5×106/ml；
2、常溫運輸：細胞貼壁覆蓋瓶底面積達40%以上時，裝滿培養(yǎng)液，瓶口用封口膜封好，裝入盒子，盒子里用泡沫或棉花塞滿，讓瓶子固定在盒子中。
三、服務(wù)特點
1、針對不同細胞系篩選合適的轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒濃度配比，提高轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達量
2、豐富的抗生素篩選經(jīng)驗和單細胞克隆鑒定方法提高實驗效率
3、構(gòu)建的穩(wěn)定表達細胞株可穩(wěn)定傳代，極少發(fā)生性狀丟失
四、收費標準
服務(wù)項目
收費標準￥
實驗周期
蛋白瞬時表達或敲低
基因表達或敲低載體構(gòu)建
請參見載體構(gòu)建目錄
2-3周
質(zhì)粒大提（含去內(nèi)毒素）
700/質(zhì)粒
1周
載體轉(zhuǎn)染
3000/樣品
Western Blot檢測蛋白表達或敲低
2000/目的蛋白/膜
2周
蛋白穩(wěn)定表達細胞株構(gòu)建（混合克隆）
表達載體構(gòu)建
轉(zhuǎn)染和抗生素篩選
40000/細胞系
3-4周
Western Blot檢測穩(wěn)定細胞株蛋白表達
蛋白穩(wěn)定表達細胞株構(gòu)建（單克隆）
50000/細胞系
6-8周
蛋白敲低細胞系構(gòu)建（單克隆）
shRNA表達載體的構(gòu)建
60000/細胞系
Western Blot檢測敲低細胞株蛋白表達
蛋白真核表達（分泌表達）
分泌型表達載體的構(gòu)建
細胞轉(zhuǎn)染
3000/質(zhì)粒
蛋白表達檢測（Western Blot或 ELISA）
2000/目的蛋白/膜；600/板
蛋白表達和純化
20000/mg
五、客戶提供材料 1、待克隆基因和載體信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如無相關(guān)shRNA序列信息，本公司可代為設(shè)計并收取相關(guān)費用；
2、待轉(zhuǎn)染細胞株(如需使用常用腫瘤細胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供)；
3、陽性對照樣品（盡量提供）
4、相關(guān)文獻（可選）
六、提交給客戶結(jié)果
1、構(gòu)建完成的載體和甘油菌株；
2、完整測序報告和序列堿基圖
3、載體真核表達鑒定結(jié)果
4、載體真核表達蛋白
5、穩(wěn)定表達細胞株>1×107
6、穩(wěn)定敲低細胞株>1×107
7、完整實驗報告（包括基因擴增圖，細胞株過表達和敲低檢測結(jié)果圖等）
皖公網(wǎng)安備 34010402700852號
