miRNA質粒載體

miRNA質粒載體 

MicroRNA（miRNA）是一類真核生物內源性的小分子單鏈RNA，通常長為18~25nt，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基配對結合，引起靶序列降解或抑制其翻譯，從而對基因進行轉錄后的表達調控。

MicroRNA 表達載體構建

MicroRNA（miRNA）是一類真核生物內源性的小分子單鏈RNA，通常長為18~25nt，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基配對結合，引起靶序列降解或抑制其翻譯，從而對基因進行轉錄后的表達調控（如右圖所示）。SYNTHBIO MicroRNA載體利用CMV啟動子可以在眾多哺乳動物細胞中快速、高效、持續表達pre-miRNA，經過Drosha（RNaseⅢ）作用形成small hairpin pre-miRNAs（約70nt），再過Dicer作用形成成熟的microRNA（約22nt），作用靶mRNA，起到表達調控作用。

microRNA過表達載體

SYNTHBIO提供兩種過表達的方式：

1. 從天然的基因組序列中表達pre-miRNA轉錄本構建pre-microRNA。插入序列不僅包含pre-miRNA莖環結構，同時構建100-200bp長的上下游兩端的側翼序列。使用使用pol-Ⅱ（如CMV）啟動子，這種構建方式保證高水平的表達pre-microRNA。表達出來的pre-miRNA的生理活動盡可能接近天然狀態。

使用這種構建方式，客戶只需提供miRNA的具體信息及指定過表達載體類型（如SYNTHBIOpEX系列 M核過表達載體?，我們完成序列合成，質粒構建。

2. 利用SYNTHBIO優化過的載體，模擬內源miRNA-155的表達模塊，這種構建方法解決了不同miRNA表達效率差異的問題，同時也有效的避免了有些內源miRNA表達時產生-3p，-5p的問題。miRNA的發夾序列融合在EGFP報告基因的后面，模擬miRNA在體內的成熟過程。

備注：保證插入序列正確，不保證miRNA的過表達效率，不保證轉染效率。所有實驗僅供科研使用。

microRNA抑制子表達載體

SYNTHBIO提供兩種miRNA抑制子載體構建的方式：


1. ;)PAN>利用SYNTHBIO優化過的載體，模擬內源miRNA-155的表達模塊，來表達miRNA inhibitor序列。這種構建與SYNTHBIO miRNA過表達方式2使用同樣的載體系統，方便客戶使用同一套系統完成miRNA的過表達與抑制。
使用這種構建方式，客戶只需提供miRNA的具體信息，我們完成序列合成，質粒構建。

miRNA sponge的特點：

a. 由于miR Sponges是由質粒編碼的，它能夠通過真核表達載體達到穩定沉默細胞microRNA的目的；
b. 能夠沉默整個家族的microRNA以達到對整個家族microRNA功能的研究；
c. 可以利用miR Sponges實現體內外loss of function研究；
d. 可以用來檢測luciferase靶基因報告系統分析；
e. 可以自由組合串聯不同miRNA抑制子序列，達到沉默多種不同miRNA的目的。
使用這種構建方式，客戶需提供miRNA的具體信息、預構建miRNA inhibitor的重復數及預構建inhibitor的序列信息，我們完成序列合成，質粒構建。

SYNTHBIO公司已經利用自己的miRNA載體骨架成功構建為數眾多的miRNA的過表達載體，載體庫中的miRNA expression vectors 1周之內即可出貨，價格更優。

2. miRNA sponge（海綿）載體構建：SYNTHBIO通過構建載體，表達包含多個成熟miRNA結合位點的RNA序列，通過吸附結合成熟miRNA，從而抑制miRNA的作用，從而進行功能缺失性研究。

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